EKSPRESI ENZIM Tth DNA POLIMERASE REKOMBINAN PADA Escherichia coli BL21(DE3) MELALUI KO-EKSPRESI KOMBINASI CHAPERON GroEL/ES dan Trigger Factor
No Thumbnail Available
Date
2023-10-02
Authors
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Abstract
Penyakit infeksius berbasis virus RNA seringkali menjadi perhatian khusus karena memiliki tingkat infeksi yang tinggi, hal ini didasari pada waktu regenerasi virus RNA yang pendek dan laju evolusi yang cepat, sehingga diperlukan upaya untuk mendeteksi virus tersebut. Metode qRT-PCR merupakan metode gold standar untuk mendeteksi virus karena memiliki waktu deteksi cepat serta sensitifitas dan spesifisitas yang tinggi. Namun, kit qRT-PCR yang beredar dipasaran memiliki harga yang relatif mahal. Penggunaan Enzim Thermus thermophilus DNA Polimerase sebagai kit qRT-PCR dapat menjadi alternatif yang menguntungkan karena memiliki aktivitas ganda yakni sebagai DNA polimerase dan reverse transcriptase sehingga dapat menyederhanakan proses deteksi dan mengurangi biaya operasional. Ekspresi enzim Tth DNA Polimerase pada Escherichia coli seringkali mengarahkan pada pembentukan badan inklusi, karena tingginya laju ekspresi protein pada E. coli tidak diimbangi dengan ketersediaan protein chaperon serta kondisi sitoplasma yang tereduksi sehingga terbentuk badan inklusi yang dapat menurunkan perolehan protein terlarut. Digunakanlah ko-ekspresi chaperon kombinasi GroEL/ES dan Trigger Factor untuk mengatasi kekurangan tersebut. Pada penelitian ini, Gen His-Tth DNA Pol/pG-Tf3 ditransformasi ke dalam inang E. coli BL21(DE3), dilakukan optimasi konsentrasi penginduksi L-arabinosa dan tetrasiklin, serta ekspresi enzim His-Tth DNA Polimerase dengan dan tanpa ko-ekspresi chaperon. Hasil penelitian menunjukkan bahwa penggunaan ko-eskpresi kombinasi chaperon Trigger Factor dan GroEL-ES pada ekspresi enzim His-Tth DNA Polimerase dengan konsentrasi penginduksi L-arabinosa (5 mg/mL) dan tetrasiklin (10 ng/mL) yang optimum dapat mengurangi pembentukan badan inklusi atau menurunkan fraksi tidak larut sekitar 40 % dengan perolehan His-Tth DNA Pol/pG-Tf3 ko-ekspresi sebesar 2,4540 mg/mL.
Description
Keywords
Chaperon, E. coli, GroEL/ES