EKSPRESI ENZIM DNA POLIMERASE Thermus thermophilus REKOMBINAN PADA Escherichia coli BL21(DE3) SEBAGAI KOMPONEN KIT qRT-PCR UNTUK DIAGNOSIS COVID-19
No Thumbnail Available
Date
2023-10-02
Authors
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Abstract
COVID-19 merupakan penyakit infeksi saluran pernafasan yang disebabkan oleh virus SARS-CoV-2 dan ditetapkan sebagai pandemi oleh WHO. qRT-PCR merupakan metode “gold standard” untuk mendeteksi SARS-CoV-2 karena waktu deteksi yang cepat serta sensitifitas dan spesifisitas yang tinggi. Dalam memenuhi kebutuhan kit qRT-PCR maupun komponennya untuk diagnosis COVID-19, Indonesia masih bergantung pada impor dari negara lain sehingga membutuhkan biaya yang mahal dan waktu yang lama. DNA polimerase adalah suatu enzim yang dihasilkan dari bakteri termofilik Thermus thermophilus. Tth DNA polimerase memiliki dua aktivitas sekaligus yaitu dapat mengkatalisis reaksi polimerisasi dan reaksi transkripsi balik. Enzim Tth DNA polimerase efisien untuk digunakan pada kit qRT-PCR COVID-19 karena menyederhanakan proses deteksi dan mengurangi biaya operasional. Pada penelitian ini, dilakukan optimasi gen dan konstruksi plasmid pD861-His-Tth DNA Pol, transformasi serta ekspresi enzim Tth DNA Polimerase rekombinan secara intraselular dalam inang E. coli BL21(DE3). Hasil penelitian menunjukkan gen His-Tth DNA Polimerase hasil optimasi memiliki nilai CAI 1,00 dan karakter GC 60,64%. Enzim His-Tth DNA Polimerase berhasil diekspresikan pada inang E. coli BL21(DE3) secara intraselular dengan terkarakterisasinya pita protein berukuran 96 kDa. Kondisi optimum untuk ekspresi enzim His-Tth DNA Polimerase yaitu OD untuk memulai induksi dengan L-ramnosa pada OD600 0,4 dan waktu panen pada saat jam ke-4 setelah induksi. Kadar protein total yang didapat setelah optimasi sebesar 3,9095 mg/mL.
Description
Keywords
COVID-19, E. coli BL21(DE3), Ekspresi enzim Tth DNA Polimerase rekombinan